Luigi, son Ectochien, Mario, la Princesse Peach, et les Toads ont été « invités » à prendre des vacances à l'Hôtel du Repos Éternel. À leur arrivée, ils sont accueillis avec beaucoup d'amabilité par la maîtresse du lieu, l'ectoplasmique Ambre Brusquade. Cette dernière les amène à leurs chambres respectives. Mais dans la nuit, Luigi entend Peach crier et découvre avec stupeur qu'Ambre Brusquade était en fait de mèche avec le Roi Boo. Désireux de se venger de Luigi, il a enfermé Mario, Peach et les Toads dans des cadres. Luigi parvient à s'enfuir par le vide-ordures alors qu'il allait subir le même sort. Arrivé au sous-sol, il trouve dans le garage l'EctoblastGLU (un aspirateur à fantôme) dans le coffre de la voiture du Professeur K. Tastroff, également prisonnier dans un cadre. Après l'avoir libéré et armé de son appareil, Luigi repart chasser les fantômes et délivrer ses amis.